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使用ELISA試劑盒時必定要注意相關的事項
發布時間:2020-01-10   點擊次數:321次
   我們知道,可以用作ELISA測定的標本很廣泛,包括了體液、分泌物和排泄物等,均可作標本以測定其間某種抗體或抗原成份。這些標本搜集的時間、方法和保存都有必定的要求。今天上海通蔚生物為您
  說明:ELISA操作嚴格要求定當做出好實驗。
  按試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑。ELISA頂用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗刷的,應為新鮮的和高質量的。ELISA試劑盒自配的緩沖液使用pH計測量較正。從冰箱中取出的實驗用試劑應待溫度與室溫平衡后運用。試劑盒中本次實驗不需用的部分應及時放回冰箱保存。
  為確保試驗的成功,使用ELISA試劑盒時必定要注意相關的事項。
  1, 確認本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數目。
  2, 將倍比稀釋的規范品各0.1ml順次參加一排7孔中,1孔只加樣品稀釋液的作為對照。處理后的標本按100ul每孔參加。
  3, 酶標板加上蓋,37℃反響90分鐘。
  4, 反響后用自動洗板機吸去酶標板內的液體;或甩去酶標板內液體,再對著吸水紙拍幾下。洗刷2次。
  5,將準備好的生物素抗體工作液按每孔0.1ml順次參加。37℃反響60分鐘。
  6, 0.01M TBS或0.01M PBS洗刷3次,每次浸泡1分鐘左右。
  7,將準備好的ABC工作液按每孔0.1ml順次參加。37℃反響30分鐘。
  8, 0.01M TBS或0.01M PBS洗刷5次,ELISA試劑盒每次浸泡1-2分鐘左右。
  9, 按每孔0.1ml順次參加TMB顯色工作液,37℃避光反響,反響過程中,要常常的調查,當肉眼可見規范品的前3-4孔有顯著的梯度藍色,后3-4孔不同不顯著時,即可參加TMB停止液0.1ml/孔。(顯色反響長不要超越30分鐘)。
  10,用酶標儀在450nm測定O.D.值。
  11,根據樣品的吸光值在坐標上找出對應的濃度。用戶也能夠使用各種應用軟件來核算。應記住由于樣品稀釋了N倍,其實際濃度應該×N。

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